Cómo combinar las partes de dos diferentes estructuras de proteínas

Se puede cruzar -link, o hacer enlaces químicos que se forman entre dos estructuras de proteínas diferentes . La reticulación puede proporcionar información sobre las identidades de dos proteínas diferentes , así como las regiones en las que forman enlaces . El proceso de reticulación es bastante simple , que implica el tratamiento de proteínas en soluciones tampón con agentes de reticulación que se unen a los grupos funcionales de las proteínas . La medida en que una proteína se adhiere a un agente de reticulación, induciendo cambios conformacionales en la proteína, proporciona información valiosa sobre el número de sitios de unión de proteínas que tiene y la capacidad de respuesta de las proteínas son a agents.Things unión que necesitará
solución tampón , es decir, tampón fosfato a pH 7,5
tubos Eppendorf
glutaraldehído u otro agente de reticulación de elección
Micropipetas
Tris -HCl de
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Matemáticas 1

Crear una solución de volumen total de alrededor de 100 microlitros . Pipeta de 50 a 100 microgramos de proteínas que interactúan en un Eppendorf que contiene 20 mM de tampón de fosfato .
2

Añadir 5 microlitros de 2,3 por ciento de glutaraldehído , mediante pipeteo , de dos a cinco minutos. Incubar la solución a 37 grados Celsius.
3

Terminar la reacción de reticulación mediante la adición , a través de pipeteo , 10 microlitros de 1 M Tris -HCl , pH 8,0.