Cómo preparar un cóctel inhibidor de la proteasa

Los inhibidores de proteasas son enzimas que inhiben la acción de las proteasas , que son ciertas enzimas que destruyen las proteínas dentro de las células . Hay varias proteasas que se dirigen a diferentes proteínas . Por lo tanto , para preservar la funcionalidad de las proteínas después de la lisis celular , una combinación , o cócteles , de inhibidores de la proteasa se ​​utiliza . Estos están disponibles en la solución, tableta o en polvo form.Things que necesitará
PMSF
Bestatina
aprotinina
Leupeptina
Pepstatina
EDTA pH ~ 8
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Inhibidores de la proteasa de
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Hacer aprotinina , leupeptina y pepstatina en concentraions acciones de 100um ( micromolar ) .

aprotinina está disponible en forma de solución en una concentración madre de 100 mM .

Para hacer 1 ml ( mililitros) de 100um , disolver 1 ul ( microlitros ) en 999ul de la 1X PBS ( solución tampón fisiológica ) .

leupeptina está disponible como un polvo . Peso molecular del Leupeptina es 475.6 . Disolver 100 ug (microgramos ) de polvo en 2 ml de agua para hacer un balance de la concentración de 100um .

Para hacer Pepstatina , disolver 100 ug de pepstatina en polvo en 1,45 ml de agua para hacer una concentración de reserva de 100um .

Todo esto puede ser en conjunto o de forma individual almacenado a menos 80 grados Celsius mixto.
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Hacer PMSF ( fluoruro de sulfonilo fenilmetil ) en stock 100 mM . PMSF se presenta en forma de polvo. El peso molecular de PMSF es 174,19 . Disolver 10 mg de PMSF en 572 ul de 100 por ciento de etanol y almacenar a 4 grados Celsius. Es sensible a la luz y se almacena en la oscuridad.

Esto se añade al tampón de lisis justo antes de su uso.
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Mezclar las proteasas junto a las concentraciones necesarias . Generalmente se diluyen en un factor de 100 para su uso.