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Cómo construir vectores de expresiónvectores de expresión que se utilizan en la biotecnología para producir muchas copias de una proteína específica. Por ejemplo , la insulina utilizada para tratar la diabetes es producida en masa a través de la ayuda de vectores de expresión . Instrucciones La construcción de un vector de expresión 1 Determinar la secuencia de ADN de la proteína específica . Una vez que se determina la secuencia de ADN de la proteína , cortar la secuencia de ADN del genoma utilizando una enzima de restricción específica . Las enzimas de restricción reconocen y se cortan en una secuencia específica del genoma . insertar el ADN específico en el vector . Un vector es una molécula de ADN que introduce ADN extraño en una célula huésped , el uso de enzimas de la célula para producir la proteína de la ADN extraño . Inserte una secuencia promotora aguas abajo del gen de interés . Un promotor es una región que es reconocida por la ARN polimerasa , que se une a la secuencia y se inicia la transcripción del gen . Añadir la enzima ligasa para unir la secuencia de promotor para el gen de interés . Inserte el vector de expresión en una célula huésped a través de transformación , la inducción de agujeros transitorios ( utilizando sal ) en la membrana celular . El vector de expresión puede ser transcrito por ARNm y se traduce en una proteína. Realice una prueba de detección para determinar si la célula huésped tiene la vector de expresión . La célula huésped está chapada primero usando la técnica aséptica ( que pasa el equipo a través de una llama ) sobre una placa de agar para el crecimiento del cultivo celular . de transferencia de algunas células de la placa de agar en un disco de papel de nitrocelulosa . Analice las células en el disco mediante el tratamiento con sal . Esto liberará los contenidos de las celdas en el disco . Sumergir el disco de papel de nitrocelulosa con una solución de una sonda de anticuerpo específico con una etiqueta fluorescente . El anticuerpo se unirá a la proteína producida por el ADN de interés . Exponga el disco de papel de nitrocelulosa a la luz UV . Si la celda tiene el vector de expresión , la célula será fluorescente bajo luz UV debido a la unión del producto de la proteína con el anticuerpo con una etiqueta fluorescente extrae el producto de proteína a través de métodos de purificación .; que puede ser utilizada con fines medicinales. colegio
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