Cómo validar instrumentos HPLC

cromatografía líquida de alto rendimiento o HPLC , es un método común de análisis químico instrumental. El método implica la inyección de una muestra de líquido en un aparato de HPLC , donde se lleva a lo largo de por un flujo de disolvente y se separa en sus componentes químicos medida que se mueve a través de una columna de relleno . La identidad y la cantidad de cada producto químico se calculan a partir de una respuesta del detector . Con el fin de validar un instrumento HPLC y asegurarse de que funciona correctamente , compruebe cada componente para function.Things adecuados que necesitará
instrumento HPLC con bomba, inyector automático , detector y del equipo de adquisición de datos
estándar de la muestra de verificación
Dos disolventes de la fase móvil
cilindro graduado
Cronómetro
Pesar escala
Calculadora
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Validación de HPLC Instrumentación Matemáticas 1

Establecer la bomba a una tasa de flujo de la fase móvil nominal ( por ejemplo , 2 mililitros por minuto ) . Coloque la línea de salida de disolvente en un cilindro graduado . Inicie el cronómetro y permita que la bomba funcione durante un periodo de tiempo determinado. Leer el volumen de disolvente en el cilindro graduado . El volumen recogido debe ser igual a la tasa de flujo multiplicado por el período de tiempo para demostrar la programación de caudal de la bomba está funcionando.
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Coloque la bomba para producir una proporción dada de los dos disolventes de la fase móvil. Coloque la línea de salida de disolvente en una previamente pesado cilindro graduado y permita que la bomba funcione hasta 50 a 100 mililitros de disolvente por cobrar. Leer el volumen exacto de disolvente en el cilindro y luego se vuelve a pesar el cilindro con el disolvente . Calcular el peso de disolvente dispensado. A partir del peso y las densidades respectivas de los dos disolventes puros , calcular la relación de disolventes dispensados ​​en el cilindro . Esta relación debe ser igual a la relación programada en la bomba de HPLC.
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Cargue una muestra de verificación estándar en el inyector automático y configurarlo para realizar por lo menos diez inyecciones repetidas de la norma. La muestra de verificación debe contener un producto químico específico que el detector responde a HPLC y la concentración del producto químico en la muestra debe ser conocida . Para cada inyección , grabar la salida del detector incluyendo el tiempo de retención del analito y la respuesta del detector ( altura del pico o área ) . Calcular la media y la desviación estándar para todos los tiempos de retención y diez respuestas. Compruebe que la desviación estándar en cada caso es pequeño en comparación con el valor absoluto de la hora y el detector de respuesta retención media . Esto le permitirá validar la precisión del muestreador automático , la columna y el detector.