? ¿Qué ocurre primero en la producción de un plásmido recombinante

Prácticamente todo el ADN se compone de cuatro bases : adenina (A ) , citosina (C ) , guanina ( G) y timina (T ) . Esta coherencia notable en todas estas especies permite que los genes de un organismo a cortar y pegar en el genoma de otro organismo. Por ejemplo , genes de proteínas de medusas fluorescentes se han introducido en bacterias , que luego producen la proteína . Los plásmidos que contienen ADN de otras especies se denominan plásmidos recombinantes . La selección de genes

El primer paso en la producción de un plásmido recombinante es identificar qué gen o genes a introducir en un plásmido preexistente. Además del gen ( s) de interés , se elige un gen indicador para diferenciar las células recombinantes a partir de células no recombinantes en pasos posteriores del proceso . El gen indicador más común es un gen de resistencia a los antibióticos no es nativo de la especie del huésped de modo que sólo las células recombinantes tendrán el gen de resistencia a los antibióticos conferida por el plásmido .
Selección del sitio

Las enzimas de restricción cortan el ADN sólo en secuencias específicas . Algunas producen extremos llamados " pegajosos" , en el que una hebra es unos pocos pares de bases más largo que el otro , mientras que otros producen extremos romos , en la que ambas hebras se cortan en el mismo lugar . Los mapas de restricción que muestran todos los sitios de corte de enzimas de restricción conocidas están disponibles para muchos plásmidos. Usando estos mapas , los científicos eligen sitios de restricción compatibles en el plásmido y a ambos lados de los genes de interés con el fin de cortar los genes de su ADN nativo y hacer aberturas para ellos en el plásmido .

restricción digestión enzimática

la digestión con enzimas de restricción es el proceso de incubar el ADN a ser cortado con las enzimas de restricción apropiadas . Debido a que el ADN deseado está mezclado con trozos de otro ADN , los científicos usan electroforesis en gel para separar los fragmentos por tamaño y aislar el ADN deseado . Esto es seguido por la ligadura , en el que los extremos de los genes seleccionados se unen con los extremos del plásmido . El plásmido recombinante ahora contiene los genes de interés y el gen de resistencia a los antibióticos .
Amplificación

La amplificación es la copia masa de material genético . En el caso de un plásmido recombinante , el plásmido se introduce en células bacterianas . No todas las células tendrán éxito en un plásmido de modo que las células se cultivan en un medio que contiene un antibiótico que es letal para las bacterias no recombinantes . Debido a que las células recombinantes que tienen el gen de resistencia a los antibióticos conferida por el plásmido , sólo van a sobrevivir y multiplicarse . Las células se lisan , o rotos, y el ADN se extrae y purifica.