Cómo detectar mutaciones en electroforesis en gel

La electroforesis en gel es un componente importante de la biología molecular , ya que permite al usuario visualizar ADN y ARN , que son los materiales genéticos de la vida . Los científicos utilizan esta tecnología para estudiar la genética de muchas maneras , y en casi todos los experimentos con material genético. Se trata de ejecutar el material genético a través de una matriz sólida que permite que el material genético para separar cabo de acuerdo con diferentes propiedades tales como el tamaño y charge.Things eléctricos que necesitará
en gel de agar ( también conocido como agarosa )
máquina Electroforesis
Buffer Venta Cargando debido
Pipetas y puntas
de control Ladder
muestras de ADN purificado ( que contiene sólo 1 sección de ADN conocida )
Mostrar Más instrucciones Matemáticas 1

Crear la matriz de gel siguiendo las instrucciones en el envase de los medios de gel. La mayoría de los geles se realizan entre 0,7 % y 2 % de agarosa . La concentración de agar extremo inferior dará una buena separación de los fragmentos de ADN entre 5 y 10 kb , mientras que un gel 2 % mostrará una buena separación de los fragmentos más pequeños ( 0,2 - 1 kb ) . Cuando la agarosa se ​​enfría hasta justo por encima de endurecimiento , añadir bromuro de etidio para el gel a una concentración de 10mg/ml . Agitar para mezclar antes de servir , con cuidado de no crear burbujas . Asegúrese de insertar los peines mientras que el gel es suave para que los pozos se crean para las muestras de ADN. Deje gel se endurezca durante al menos 30 minutos antes de cargar las muestras .
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Haga solución tampón. Un tampón estándar para la electroforesis en gel es de Tris - Borato - EDTA , que puede hacerse mediante la disolución de 218 g Tris base , ácido bórico y EDTA 110g 9,3 g en 1,9 litros de agua destilada . Utilice NaOH para ajustar cuidadosamente el pH a 8,3 . Esto le da una solución 10X. Diluir hasta hacer un lote de solución 0.5x para uso en la máquina de electroforesis.
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gel Colocar en la máquina de la electroforesis, y cubrir con una solución tampón.
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Mix 2 - . . 4μL de cada muestra de ADN con aproximadamente 5 l de tinte
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Cargar primer pozo con el marcador y el tinte
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empezando por el segundo pozo , comenzará la carga de cada muestra. Terminar con el carril de la última carga con el mismo marcador .
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Cierre la máquina de gel y conecte la alimentación . Correr el gel a 5V/cm .
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Apague la fuente de energía durante la carga de tinte ha llegado cerca del otro lado del gel . Tenga cuidado para controlar el gel para que el colorante de carga no se ejecuta fuera del otro extremo del gel.
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Quitar el gel del tanque y la vista en un cuarto oscuro con una luz UV.

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Nota el marcador en la escalera que es el tamaño se espera que el fragmento de ADN de tipo salvaje ( no mutante ) a ser. Si la muestra es pura, la banda correspondiente de las muestras es la de tipo salvaje y todas las demás bandas representan mutantes.