Cómo mejorar la filtración en gel

La filtración en gel es una técnica cromatográfica que se utiliza para separar moléculas en una mezcla sobre la base de su tamaño de partícula . Cuando se aplica una muestra a una columna rellena con el medio de filtración en gel , las moléculas más pequeñas en la muestra se mueven dentro de los poros del medio de filtración. Las moléculas que son más grandes que este tamaño de poro no pueden difundir en el medio y pasar a través de la columna , que aparece primero en el líquido eluido de la columna . Resolución - el grado de separación de los componentes en la mezcla - depende de varios factores , tales como el volumen de la muestra , la naturaleza de la columna de filtración y su intervalo de fraccionamiento . Instrucciones Matemáticas 1

Seleccione un medio de filtración adecuada en función de la naturaleza de la muestra. Elige medios con un intervalo de fraccionamiento que se extiende por los pesos moleculares de los componentes presentes en la muestra . Si muchos medios de comunicación tienen rangos de fraccionamiento similares , seleccione el que tiene la curva de selectividad más empinada para lograr la mejor resolución.
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Utilice varias columnas acopladas en serie para aumentar la altura del lecho eficaz. Esto asegura una separación más eficiente , siempre que las columnas todos contienen el mismo medio de separación .
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Determinar el volumen de la muestra exacta para ser utilizado . Generalmente , esto no debería ser mayor que 2 por ciento del volumen total de la columna . Comience con un volumen de 0,5 por ciento y llevar a cabo pruebas de funcionamiento a incrementar los volúmenes de muestra para encontrar el valor que se obtiene mejor resolución . Evitar el uso de volúmenes de muestra de menos de 0,5 ml debido a los bajos volúmenes perjudican resolución.
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Concentrar las muestras antes de su aplicación a la columna de filtración en gel . Esto mejora el grado de separación; Sin embargo, asegúrese de utilizar concentraciones menores de 70 mg /ml con muestras de proteínas para evitar la interferencia debida a los efectos de la viscosidad .
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Degas amortigua es necesario utilizar en la separación por filtración de ellos bajo un vacío . Si las burbujas de aire entran en la columna de la filtración, que afectan al rendimiento de la columna.
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Utilice el caudal más bajo posible para evitar la ampliación del pico . Picos anchos dan resultados que no son tan precisos como los estrechos.