Protocolos para un cultivo de tejido

cultivo de tejidos generalmente se refiere al crecimiento y mantenimiento de células animales fuera de su huésped original . Es una parte fundamental de la biología molecular y da una idea de una serie de mecanismos de la enfermedad . Los cultivos celulares se mantuvieron en medio de cultivo de células que contienen micro- macro y nutrientes necesarios para el crecimiento , sales inorgánicas para regular el pH y antibióticos para limitar la contaminación . El cultivo de tejidos se realiza en cabinas de flujo laminar especialmente diseñados , y las superficies de trabajo son desinfectados para reducir el riesgo de contaminación . Reconstitución

Durante la reconstitución, un vial de células se retira del almacenamiento y se colocó en un baño de incubadora o de agua regulado a 37 grados F durante uno o dos minutos. Se tiene cuidado de no incubar el vial durante demasiado tiempo para evitar el daño celular. Las células se centrifugan para eliminar el soporte de almacenamiento , re - suspendido en medio de cultivo pre- calentado y se transfiere a un recipiente de crecimiento , ¿dónde está incubada a la temperatura óptima , generalmente 37 grados F.
Los fundamentos de Sub - cultivo

Sub - cultivo se hace para aumentar la cantidad de células mientras que los mantiene en la fase logarítmica de crecimiento . Las células crecen de manera exponencial , dependiendo de la cantidad de espacio disponible . Una vez que se maximiza el espacio , las células llegan a una etapa denominada de confluencia completa , donde las células ya no proliferan y comienzan a morir . Sub - cultivo varía ligeramente según el tipo de célula y tasa de crecimiento.
Sub - cultivo Procedimiento

Las células adherentes se fijan a la parte inferior de la vasija de crecimiento , y se retiran después de decantación medio gastado , ya sea mecánicamente mediante cepillado, o con enzimas tales como tripsina , que separa las células de la superficie. En contraste , las líneas celulares continuas circulan en el medio de cultivo y se separan durante la centrifugación . Las células se centrifugan para eliminar la tripsina y medios de comunicación. Después las células se recopilaron en una bolita y se resuspendieron en medio de cultivo . Una pequeña porción de la re- suspensión se tiñe con colorante azul de tripano , se contaron y se evaluó para la viabilidad , ya sea manualmente utilizando un microscopio y hemocitómetro , o por un contador de células automatizado. De acuerdo con los requisitos de tasa de crecimiento y de laboratorio , una concentración celular específica se coloca en un recipiente de cultivo que contiene el volumen apropiado de medio de cultivo fresco.

Almacenamiento

células de cultivo de tejidos son almacenan en nitrógeno líquido o en un congelador por debajo de -130 grados Celsius. Se requiere un equipo de protección al colocar o retirar las células del nitrógeno líquido . Una concentración conocida de células viables se suspende en medios de almacenamiento tales como dimetil sulfóxido (DMSO ) y el glicerol , se transfirió a un matraz de almacenamiento adecuado y se colocaron en nitrógeno líquido o un congelador. La velocidad de enfriamiento es controlado ya sea por las unidades de congelación electrónicos o recipientes llenos de alcohol para garantizar la disminución de la temperatura no es demasiado drástico para causar ningún daño a las células .