Cómo diseñar un Sequencing Primer

Los mejores cebadores de secuenciación son secuencias únicas que recocer sólo para el tramo previsto de ADN molde con precisión a la temperatura de gama media . No forman bucles en horquilla --- es decir , de vuelta veces y recocido a sí mismos --- ni tampoco hibridar con el otro cebador ( dímeros de cebadores forma ) . Instrucciones Matemáticas 1

Diseñar la imprimación en base a una longitud de secuencia de al menos cincuenta nucleótidos de distancia de los extremos del ADN molde que desea extender . ¿Quieres buena superposición .
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Elija una secuencia que no tiene largos tramos de cualquier base de , sobre todo, no largos tramos de Gs o Cs .
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Elija una longitud de entre 18 a 30 nucleótidos de longitud con al menos 40 a 60 por ciento de contenido de GC . Esto le dará un punto de fusión óptima ( Tm ) rango de entre 45 y 65 grados Celsius.
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Compruebe la secuencia frente a secuencias en GenBank para asegurarse de que no han elegido un sitio activo , tales como un dominio común que se prime no específica a múltiples genes .
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Asegúrese de que el 3 ' ( tres prima ) final de su cartilla no es tan pesado en Gs y Cs que se une a múltiples sitios .
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Escribe tus dos cebadores en 5 ' a 3' (cinco prime a tres prima ) dirección en el pedido . Para ello será necesario que escriba el complemento inverso de su primer inversa .