Cómo hacer geles de poliacrilamida

Aunque puede utilizar geles de poliacrilamida para la separación de ADN, que son más adecuados para la separación de proteínas y caracterización. Son ampliamente utilizados para estudiar peso molecular, carga , estructura y pureza de las proteínas . La movilidad electroforética de las proteínas les permite viajar a través de la red de polímeros de acrilamida cuando se aplica corriente . Las proteínas se separan según sus size.Things que necesitará
placas de vidrio
Comb
Spacer
Clamps
Jeringa
Guantes de seguridad
150 ml frasco
26,6 ml de 29 % de acrilamida , más 1 % de N, N - metilenbisacrilamida
52,7 ml de agua
20 ml de 5X de Tris /BorateEDTA ( TBE ) tampón
0,7 ml de 10 % de persulfato de amonio
35 micro litros de TEMED

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Póngase los guantes . Limpie y seque las placas de vidrio , peine y espaciadores.
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Ponga la placa más grande en una superficie limpia y seca . Coloque los separadores en ambos lados y la cubierta con plato más pequeño . Alinee con cuidado las placas con los separadores en dos lados y la parte inferior. Fije los tres lados de las placas para sellar y mantenerlos juntos .
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Calcular la cantidad de volumen de gel necesaria para el tamaño de las placas y el espesor de los espaciadores.
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Determine por ciento de solución de poliacrilamida necesario para su experimento. Para 100 ml de un gel de poliacrilamida al 8 % , la mezcla 26,6 ml de 29 % de acrilamida , más 1 % de N, N - metilenbisacrilamida , 52,7 ml de agua , 20 ml de 5X TBE y 0.7 mL de 10 % de persulfato de amonio en un matraz pequeño . Añadir 35 microlitros de TEMED a la solución y mezclar suavemente . Trabaje con rapidez después de añadir TEMED . Llene una jeringa con la solución y distribuir cuidadosamente el contenido en el espacio vacío entre las placas hasta que la solución es ligeramente por debajo de la placa más pequeña.
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Inserte cuidadosamente el peine bien formando entre las placas grandes y pequeñas en la parte superior las placas ensambladas . Deje que el gel se polimeriza por completo durante aproximadamente una hora .
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Retire suavemente el peine. Lavar los pocillos con 1X TBE para limpiarlos. Quite las abrazaderas y colocar el gel en el aparato de electroforesis de acuerdo con las instrucciones del fabricante . El gel de poliacrilamida está listo para utilizar para su experimento.