Cómo permeabilizar THP- 1

THP- 1 es una línea celular de leucemia monocítica aguda humana , que se obtuvo originalmente de un lactante varón de 1 año de edad . La línea celular se utiliza para la investigación científica , y se puede permeabilized con unos sencillos pasos . Permeabilización es un proceso esencial si se quiere detectar antígenos intracelulares en su línea de células THP- 1 . Los detergentes, tales como saponina , Triton X - 100 y Tween - 20 , son reactivos de permeabilización comunes, que ayudan a hacer agujeros en la membrana celular de THP - 1 . El tiempo de permeabilización exacta y la concentración del reactivo depende del experimento . Siga siempre las instrucciones de sus protocol.Things específicos que necesitará
cubreobjetos poli-L- lisina
10 por ciento de formaldehído
detergente , tal como Triton X- 100
-buffer fosfato salino
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Cultura de las células THP- 1 sobre un cubreobjetos de poli -L- lisina a 10.000 células por mililitro , o en una concentración recomendada por su protocolo.
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Fijar las células con una solución de formaldehído al 10 por ciento durante una hora, o un período de tiempo recomendado por el protocolo . Opcionalmente, fijar las células después de la permeabilización
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lavan las células con solución salina tamponada con fosfato tres veces por inmersión de los portaobjetos en una solución de PBS. .
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permeabilizar las células THP - 1 con 0,5 por ciento X - 100 solución de Triton durante 25 minutos , o solución de saponina 0,05 por ciento durante 20 minutos a temperatura ambiente . Hacer que el 0,5 por ciento X - 100 solución de Triton de la adición de 500 microlitros de 10 por ciento de Triton X - 100 a 9500 microlitros de PBS . Hacer la solución de saponina 0,05 por ciento mediante la adición de 500 microlitros de solución de saponina 1 por ciento en 9500 microlitros de PBS .
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Lavar tres veces con PBS . Las células THP- 1 ahora se permeabilizaron y listo para el bloqueo y la incubación con el anticuerpo .